Táirgeadh agus tréithriú bithcheimiceach lacáise beacán oisrí NRC 620 agus meastóireacht ar a éifeachtúlacht i soiléiriú sú úll.

Tar éis 25 lá de ghoir statach ag 28°C, léirigh laccase ó *Pleurotus ostreatus* NRC620 an ghníomhaíocht is airde sa mheán cultúir fungasach. Ba iad 3.0 agus 70°C, faoi seach, na luachanna pH agus teochta is fearr don einsím seo. Tar éis 2 uair an chloig de ghoir ag 40°C agus 50°C, choinnigh an ghníomhaíocht einsíme 68.33% agus 59.61%, faoi seach. Tar éis 2 uair an chloig de ghoir i maolán citrate-fosfáite (pH 7.0), d'fhan an ghníomhaíocht einsíme ag 100%. Mhéadaigh cur leis 10 mM MgSO₄ agus CuSO₄ an ghníomhaíocht einsíme faoi thart ar 21% agus 35%, faoi seach, agus chuir NaCl, MnCl₂, KCl, agus CaCl₂ cosc ​​ar ghníomhaíocht an einsíme. Agus ABTS á úsáid mar shubstráit, ba iad na paraiméadair chinéiteacha (Km agus Vmax) de laccase *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ná 1.99 mM agus 16,217 μmol min−1 L−1, faoi seach. Laghdaigh cóireáil einsímeach ar shamplaí sú úll an pH agus an slaodacht go suntasach, agus bhí baint ag an laghdú seo le méadú ar an am stórála. Mar thoradh ar chóireáil laccase, tháinig laghdú beag ar ábhar feanólach iomlán sú úll, ach níor breathnaíodh aon laghdú ar ghníomhaíocht frithocsaídeach.
Le blianta beaga anuas, tá taighdeoirí dírithe ar chur i bhfeidhm na biteicneolaíochta glasa sa tionscal bia. Tá lacáis ar cheann de na heinsímí is úsáidí sa tionscal bia, agus aimsítear feidhmeanna i réimsí ar nós próiseáil sú, bácáil, cobhsú fíona, agus feabhas a chur ar cháilíochtaí orgánaileipteacha táirgí bia.¹Scaoileann go leor plandaí agus miocrorgánach níos airde lacáis,²agus is féidir le fungais ar nós deuteromycetes, ascomycetes, agus basidiomycetes laccase a tháirgeadh freisin.³Is ocsaídáis ghorm é lacáis (EC 1.10.3.2) a laghdaíonn ocsaigin mhóilíneach go huisce ag baint úsáide as córas ina bhfuil trí adamh copair éagsúla, rud a ocsaídíonn comhdhúile feanólacha éagsúla agus aimíní aramatacha. Le linn súnna torthaí agus glasraí a tháirgeadh, is saincheisteanna ríthábhachtacha iad donnú einsímeach agus neamh-einsímeach.⁴Ós rud é go mbíonn tionchar diúltach ag na substaintí seo ar dhath, blas agus boladh an sú, ní mór iad a bhaint.⁵
As na torthaí uile, is iad úlla na cinn is mó a ithetar ar fud an domhain agus san Aontas Eorpach. Sa bhliain 2019, bhí táirgeadh úll sa tríú háit ar fud an domhain, ag breis is 87 milliún tonna.⁶Tá go leor comhdhúile feanólacha in úlla, lena n-áirítear flavonoidí agus aigéid feanólacha amhail aigéad caiféach agus aigéad clóirígineach.⁷Ós rud é go n-óltar sú úll de ghnáth ina fhoirm shoiléir, cailltear thart ar 50% go 90% de na comhpháirteanna feanólacha le linn an phróisis scagacháin.⁸Sa lá atá inniu ann, is gnách le tomhaltóirí táirgí nach bhfuil mórán próiseála déanta orthu a roghnú, amhail sú úll scamallach a bhfuil cion ard polaifeanóil ann. Mar sin féin, mar gheall ar an cion ard feanólach atá ann, tá an cineál seo sú úll an-seansaithe do dhídhathú agus do dhorchadú.⁹Úsáidtear teicneolaíochtaí éagsúla, lena n-áirítear modhanna cóireála teasa amhail pasteurú ag 60–90°C, chun dorchadas sú úll a laghdú nó a chosc.¹⁰Mar sin féin, de réir taighde ag Sauceda-Gálvez¹¹, is féidir le próiseáil theirmeach ceimiceáin so-ghalaithe a scriosadh agus tionchar a imirt ar cháilíochtaí orgánaileipteacha sú úll. I measc na modhanna próiseála teirmeacha tá dé-ocsaíd charbóin fhorchriticiúil, radaíocht ultraivialait, ultrafhuaime, brú hidreastatach ard, nó homaiginiú ardbhrú.¹²Braitheann éifeachtúlacht na dteicneolaíochtaí seo agus toradh súnna torthaí oiriúnacha ar na paraiméadair a úsáidtear agus ar shaintréithe an táirge. Tá a n-úsáid fhorleathan teoranta ag costais arda, drochthionchar ar cháilíocht roinnt táirgí bia, nó neamhleor díghníomhachtú einsímí.^13,14
Is féidir laccase a úsáid chun sú torthaí a chobhsú agus a shoiléiriú.¹⁵Gökmen et al.¹⁶Moltar úsáid laccase le haghaidh soiléiriú sú torthaí mar go mbaintear comhdhúile feanólacha go héifeachtach leo trína thiontú ina bpolaiméirí nó ina n-olaigiméirí is féidir a bhaint go héasca le haon scannán ultrascagacháin, rud a ligeann do sú úll dath agus soiléireacht chobhsaí a choinneáil ar feadh suas le sé seachtaine ag 50°C. Rinneadh laccase íonaithe *Trichoderma* a dhíghluaiseacht ar choirníní alúmana agus úsáideadh é chun comhdhúile neamhbhlasta de bharr éillithe miocróbach sú úll a bhaint go roghnach.¹⁷
Is eistir agus aldehídí iad thart ar 80-90% de na comhpháirteanna so-ghalaithe i sú úll, rud a thugann boladh uathúil don sú.¹⁸Cuireadh laccase ó *Trametes versicolor* ar thaca saor déanta as snáithín nádúrtha ó bhlaoscanna cnó cócó óga chun sú úll a shoiléiriú.¹⁹Rinne staidéir roimhe seo imscrúdú ar chobhsú sú úll (dath agus moirtiúlacht) ag baint úsáide as modhanna saor ó einsímí nó modhanna imghluaiseachta, nó i gcomhar le huaiscagachán.^5,19Mar sin féin, níl an tionchar a bhíonn ag laccases fungasacha ar airíonna fisiciceimiceacha sú úll le linn stórála soiléir fós. Dá bhrí sin, ba é aidhm an staidéir seo imscrúdú turgnamhach a dhéanamh ar na hathruithe ar airíonna fisiciceimiceacha, ar ábhar comhdhúile feanólacha, agus ar ghníomhaíocht frithocsaídeach sú úll tar éis cóireála le laccases fungasacha agus stóráil cuisnithe ar feadh dhá sheachtain. Tá an cumas ag laccases comhdhúile feanólacha a ocsaídiú, rud a fhágann go bhfuil siad gealladh fúthu lena n-úsáid i bpróisis thionsclaíocha éagsúla, lena n-áirítear soiléiriú sú. Rinne an staidéar seo scrúdú ar laccases ó *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ag díriú ar na coinníollacha idéalacha dá ngníomhaíocht agus dá n-éifeachtúlacht i soiléiriú sú. Cé go bhfuil taighde ar bheacáin oisrí (P. ostreatus NRC 620) teoranta fós, rinne staidéir roimhe seo scrúdú ar einsímí ó fhoinsí fungasacha éagsúla, amhail Trametes versicolor agus Ganoderma lucidum. Ba é aidhm an staidéir seo ná cur i bhfeidhm féideartha an einsím seo sa tionscal bia a mheas agus aird a tharraingt ar a airíonna uathúla, go háirithe a pH agus a theocht idéalach.
Ceannaíodh 2,2′-Azooxybis(3-eitilebeinsóitiasóilín-6-sulfónach aigéad) (ABTS) ó Sigma-Aldrich (Ceanada). Bhí na himoibrithe eile go léir de ghrád anailíseach.
Fuair ​​Ionad Bailithe Cultúir Miocróbach an Ionaid Náisiúnta Taighde an cineál beacán oisrí aitheanta NRC620. Tar éis fo-chultúir, stóráladh an cineál seo ar shlatanna agair deasglúise prátaí ag 4°C. Seo a leanas an modh ullmhúcháin ionaclúim: ionaclúdaíodh mícéiliam lánfhorbartha 10 lá d'aois ar phlátaí agair deasglúise prátaí agus goradh é ag 28°C. Tar éis 10 lá, baineadh trí bhloc mícéiliam 12 mm ar trastomhas as na meáin agair ag baint úsáide as punch miotail steiriúil agus cuireadh iad i bhfleascáin Erlenmeyer 250 mL le plocóidí cadáis ina raibh 50 mL de mheán cultúir steirilithe (pH 5.0, mar a thuairiscigh Othman et al. roimhe seo.²⁰). Goradh na cultúir ag 28°C ar feadh 18 lá. Ansin scagadh na cultúir trí pháipéar scagaire Whatman Uimh. 1, agus d’fheidhmigh an forshnáithín a lean mar fhoinse einsíme.
Cinneadh gníomhaíocht lacáise ag baint úsáide as ABTS mar shubstráit. Bhí 500 μL de 0.3 mM ABTS (tuaslagtha i maolán citráit sóidiam 0.1 M, pH 4.5) agus an méid riachtanach den sampla einsíme caolaithe le huisce driogtha sa mheascán imoibrithe (2 mL).^21,22Ós rud é gur féidir le laccase ABTS a ocsaídiú ag teocht an tseomra (28 °C ± 2), cinneadh ocsaídiú ABTS tríd an méadú ar ionsú a thomhas ag 420 nm (ε₄₂₀= 36,000 cm^-1 M ^-1) ag baint úsáide as speictreafótaiméadar UV Agilent Carry-100. Bhí aonad amháin de ghníomhaíocht lacáise ag teastáil chun 1 μmol ABTS in aghaidh an nóiméid a ocsaídiú. Cinneadh tiúchan próitéine trí mhodh Bradford ag baint úsáide as albaimin séiream bólachta mar rialú inmheánach.^23,24
Tar éis an einsím a fháil ón gcineál beacán oisrí NRC 620, tomhaiseadh a ghníomhaíocht ag eatraimh saothraithe éagsúla ar feadh 25 lá faoi choinníollacha statach ag 28 °C.
Chun tionchar na teochta ar ghníomhaíocht lacáise a imscrúdú, rinneadh turgnaimh sa raon teochta ó 20 go 90 °C. Sula cuireadh an einsím leis agus sula dtosaíodh an t-imoibriú, meascadh an maolán (0.1 M citráit sóidiam, pH 4.5) agus an tsubstráit (ABTS) agus goradh iad ar feadh 5 nóiméad ag teochtaí éagsúla. Rinneadh measúnú ar chobhsaíocht theirmeach an einsíme trí ghoradh i maolán fosfáite sóidiam 0.05 M (pH 7.0) ag 40, 50, 60, agus 70 °C ar feadh 2 uair an chloig, faoi seach. Rinneadh measúnú ansin ar ghníomhaíocht iarmharach ag baint úsáide as an tsubstráit ABTS.
Rinneadh measúnú ar éifeacht pH ar ghníomhaíocht lacáise ag baint úsáide as ABTS mar shubstráit i maoláin citráit-fosfáit 0.1 M le raon pH de 2.5 go 7.0. Goradh an tuaslagán einsíme ag 40°C ar feadh dhá uair an chloig i maoláin citráit agus Tris 0.1 M (pH 3, 4, 6, agus 7) chun cobhsaíocht pH a mheas. Ríomhadh an ghníomhaíocht iarmharach le ABTS mar shubstráit tar éis an ghoir.
Goradh an lacáis ar feadh 10 nóiméad i maolán fosfáite sóidiam (0.05 M, pH 7.0) ina raibh iain miotail éagsúla (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, agus Mn2+) ag tiúchain 2.5 mM agus 10 mM, faoi seach. Cuireadh an tsubstráit (ABTS) leis ansin chun an t-imoibriú a thionscnamh, agus rinneadh measúnú ar an ngníomhaíocht choibhneasta.
Rinneadh ocsaídiú ABTS ag laccase ag tiúchain éagsúla (0.025–3 mM) a thomhas ag pH 4.5 chun na paraiméadair chinéiteacha (Vmax agus Km) a chinneadh. Rinneadh an cinéiteach a mheas.^tairiseachaden chothromóid Michaelis-Menten ríomhadh ag baint úsáide as plota Lineweaver-Burk, a phlotaíonn cómhalartach an ráta imoibrithe mar fheidhm de thiúchan an tsubstráit. Ríomhadh na tairiseacha cinéiteacha ón bplota Lineweaver-Burk ag baint úsáide as bogearraí GraphPad Prism leagan 6.01.
Tar éis na húlla a ní go críochnúil le huisce sconna, gearradh ina dhá leath iad agus baineadh sú díobh ag baint úsáide as súitheoir úll Braun MP80 lán-uathoibríoch (déanta sa Ghearmáin). Scagadh an sú trí cheithre shraith éadach cáise. Níor cuireadh aon einsímí leis an ngrúpa rialaithe, agus cuireadh 2.0% lacáis (an tiúchan is éifeachtaí a tástáladh) le sú úll úr-ullmhaithe, a stóráladh ansin ag 4°C ar feadh dhá sheachtain.
Cinneadh aigéadacht intiteáilte (TA) agus pH de réir mhodh Boulton et.^al.27Tomhaiseadh pH gach sampla ag baint úsáide as méadar pH digiteach (méadar pH JENWAY 3510). Ríomhadh aigéadacht intiomtha (TA) bunaithe ar aigéad maileach ag baint úsáide as an bhfoirmle seo a leanas.
I gcás ina seasann V agus C do thoirt (mL) agus tiúchan (0.1 mol/L) an tuaslagáin hiodrocsaíde sóidiam a úsáideadh sa tíotrádú, faoi seach. Seasann K do chomhéifeacht comhshó aigéad mailíseach, atá cothrom le 0.067, agus seasann W do mhais (g) sú úll.
Na solaid intuaslagtha iomlána (^TDSCinneadh cion ) na samplaí sú uile ag baint úsáide as athraonmhéadar póca PAL-1 (ATAGO, Tóiceo, an tSeapáin). Tar éis gach tomhais, sruthlaíodh an lionsa optúil le huisce dí-ianaithe, agus tástáladh gach sampla sú úll trí huaire. Ríomhadh luach gach sampla trí mheán na dtrí thomhas a bhaint amach. Ríomhadh an meán ± diall caighdeánach do gach sampla sú úll freisin trí mheán na dtorthaí seo a bhaint amach.
Rinneadh measúnú ar shlaodacht na samplaí sú úll ag baint úsáide as slaodachtmhéadar rothlach (RV, Rheotest 2, an Ghearmáin). Cuireadh an sampla taobh istigh de shorcóir “S2″ an slaodachtmhéadair. Léiríodh an slaodacht dealraitheach le fána na cuaire struis lomadh i gcoinne an ráta lomadh, a ríomhadh ón strus lomadh agus na cuartha comhfhreagracha ag rátaí lomadh éagsúla (ó 1.00 go 437.4 s⁻¹). Seo a leanas an fhoirmle chun slaodacht dealraitheach a ríomh:
I gcás ina seasann η don slaodacht dealraitheach (cP), seasann τ don strus lomadh (dyn/cm²), seasann γ don ráta lomadh (soic⁻¹), agus ríomhtar (τ) ag baint úsáide as luachanna an chasmhóiminte (α) agus an tsorcóra (Z) ag baint úsáide as an bhfoirmle seo a leanas: τ = Z . α.
Cinneadh an t-innéacs donnúcháin de réir mhodh Meidav ​​​​et.^al.29Lártheifneoiríodh sampla sú 10 ml ag 2750 xg ar feadh 10 nóiméad. Meascadh 5 ml den fhorshnáithín sú le 5 ml d'eatánól 95%. Tomhaiseadh ionsú an mheascáin ag 420 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar UV Shimadzu (UV-1601 PC).
Cinneadh an t-ábhar feanólach iomlán (TPC) go dathmhéadrach ag baint úsáide as an imoibrí Folin-Ciocalteu mar a thuairiscigh Boulton et al.^[27Tógadh cuar caighdeánach d'aigéad galach le haghaidh tiúchain ó 0 go 500 mg/L (^r²= 0.997). Léirítear na torthaí mar choibhéisí aigéad galach (mg GAE/mL).
Cuir 125 μL d'uisce driogtha agus 2850 μL de thuaslagán FRAP le 25 μL de shú úll agus fág an meascán sa dorchadas ar feadh³⁰nóim. Ansin tomhais an ionsú ag 593 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar UV Shimadzu (UV-1601 PC). Ullmhaíodh an t-imoibrí FRAP trí mhaolán aicéatáit 300 mM (pH 3.6), clóiríd iarainn(III) 20 mM, agus 10 mM 2,4,6-tris(2-piridil)triazine (TPTZ) (tuaslagtha i 40 mM HCl) a mheascadh i gcóimheas 10:1:1. Gineadh cuar caighdeánach ag baint úsáide as Trolox mar an caighdeán (^R²= 0.999), agus léirítear na torthaí mar μM Trolox/mL.
Cinneadh gníomhaíocht frithocsaídeach na súnna cóireáilte agus neamhchóireáilte ag baint úsáide as an modh DPPH chun a gcumas fréamhacha saora DPPH a scagadh a mheas.³¹Meascadh deich micrilítear sú le 1 ml de thuaslagán DPPH (100 μM) i meatánól. Tar éis imoibriú sa dorchadas ar feadh 30 nóiméad, tomhaiseadh ionsú an mheascáin ag 517 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar UV Shimadzu (UV-1601 PC). Léiríodh na torthaí mar choibhéisí trolox (μM trolox/ml) bunaithe ar chuar calabrúcháin (_^R2= 0.990).
Léirigh na sonraí a fuarthas gur breathnaíodh an táirgeadh lacáise uasta i mbeacáin oisrí NRC 620 faoi dheireadh an 18ú lá den choipeadh, ag baint amach gníomhaíochta de 1302 U/L. D’fheidhmigh sé seo mar bhunús chun an t-am saothraithe is fearr a chinneadh le haghaidh táirgeadh lacáise (Fíor 1). Cé gur mhéadaigh táirgeadh einsímí de réir mar a mhéadaigh an t-am saothraithe, ní raibh an ráta méadaithe comhréireach go díreach leis an am saothraithe; tar éis 21 lá, ní raibh méadú ach 90 U/L ar ghníomhaíocht einsímí (go 1390 U/L). Dá bhrí sin, roghnaíodh 18 lá sa deireadh mar an t-am saothraithe is fearr chun toradh an táirge a chothromú le buntáistí eacnamaíocha an ama saothraithe mhéadaithe.
Éifeacht ama saothraithe ar tháirgeacht lacáise i Pleurotus ostreatus NRC 620. Rinneadh trí bhloc mícéiliacha fungasacha (12 mm) a ionaclú i 50 ml de mheán steiriúil agus ansin saothraíodh iad ag 28 °C ar feadh amanna éagsúla.
Ag teacht le staidéir eile, léiríonn ár dtorthaí gurb é an tréimhse saothraithe idéalach chun buaic-secretion lacáise ag fungais a bhaint amach ná idir 7 agus 36 lá.³²De réir Ezike et al.³³, Tháirg *Trametes polyzona* WRF03 an méid is airde de lacáis faoi dheireadh an naoú lá den choipeadh, le gníomhaíocht shonrach de 1637 U/mg próitéine. Ina theannta sin, Othman et al.³⁴fuarthas amach gur scaoil *Trichoderma harzianum* S7113 méid mór lacáise ar an gcúigiú lá den chultúr. Shroich ráta táirgthe an lacáise buaicghníomhaíochta ar an gceathrú lá déag agus ansin laghdaigh sé de réir a chéile.³⁴Cé gur féidir le secretion einsíme tarlú le linn na príomhchéime fáis freisin, is gnách go sroicheann sé a bhuaicphointe le linn na céime idirmheánaí agus is é tomhaltas foinse carbóin nó nítrigine a spreagann é.^34,35
Cé gur léirigh laccase ó Pleurotus ostreatus NRC 620 ardghníomhaíocht thar raon teochta leathan ó 50°C go 80°C, ag druidim le buaicghníomhaíocht (69–98%), breathnaíodh a uasghníomhaíocht ag 70°C (Fíor 2a). Lasmuigh den raon teochta seo, laghdaigh gníomhaíocht einsíme ag thart ar 70°C. Tugann na torthaí seo le fios go bhfuil an einsím gníomhach ag teochtaí arda, is dócha toisc go méadaíonn teocht ard fuinneamh cinéiteach an imoibrithe.
Éifeacht theocht imoibrithe (a) agus pH (b) ar ghníomhaíocht lacáise i *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Baineadh amach teochtaí idir 20 agus 90 °C tríd an meascán a réamh-ghoradh ag teochtaí éagsúla ar feadh 5 nóiméad sular cuireadh an einsím leis agus sular cuireadh tús leis an imoibriú. Rinneadh measúnú ar éifeacht pH ar ghníomhaíocht lacáise ag baint úsáide as ABTS mar shubstráit i dtuaslagáin ina raibh maolán citráit-fosfáit 0.1 M thar raon pH de 2.5 go 7.0.
De réir Ezike et.^al.33, is é 55 °C an teocht is fearr do *Trametes polyzona* WRF03 laccase, atá mar an gcéanna leis an teocht do *Ganoderma lucidum*^laccase36agus cosúil leis an teocht is fearr (50 °C) do *Trametes polyzona* KU-RNW02737^lacáis . ^Baldrian38tugann sé dá aire, mar atá i gcás córais einsímí eile a dhíghrádaíonn lignin, gurb é an raon teochta idéalach le haghaidh lacáise ná idir 50 agus 70 °C.
Léirigh na torthaí gur léirigh an einsím an ghníomhaíocht is airde ag pH 3.0, ag baint amach 94% gníomhaíochta ag pH 3.5. Mar sin féin, d'fhan sé gníomhach thar raon leathan pH ó 2.5 go 7.0 (Fíor 2b). Ina theannta sin, léirigh sé gníomhaíocht níos airde i ndálaí aigéadacha i gcomparáid le dálaí neodracha nó alcaileacha. D'fhan a ghníomhaíocht 77% ar a laghad thar an raon pH ó 2.5 go 4.5, ach níor shroich sé ach thart ar 38% ag pH 7.0. Ba é 4.533 an pH is fearr do lacáis ó *Trametes polyzona* WRF03, atá mar an gcéanna leis an pH do lacáisí ó *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, agus *Trametes hirsuta* 41. Mar sin féin, de réir an staidéir le Chairin et al.⁴², is é 2.2 an pH is fearr le haghaidh lacáis ó *Polymorpha f. sp.* WR710-1, agus is é 5.043 an pH is fearr le haghaidh lacáis ó *Polymorpha f. sp.* IBL-04. D’fhéadfadh ceangal anion hiodrocsaíde (coscaire lacáise) le hadaimh chopair lacáise T2/T3 a bheith ina chúis leis an laghdú ar ghníomhaíocht lacáise faoi choinníollacha pH neodracha nó alcaileacha. D’fhéadfadh sé seo cur isteach ar an aistriú inmheánach leictreon ón ionad T1 go dtí an t-ionad T2/T3, agus dá bhrí sin^teorannúgníomhaíocht an einsím23,44
Trí an einsím a ghoradh ag teochtaí difriúla, fuarthas amach go raibh tionchar ag am an ghoir agus an teocht araon ar chobhsaíocht an einsím. Is suntasach gur léirigh laccase ó *Trametes polyzona* NRC 620 cobhsaíocht níos airde ag 40℃ agus 50℃, ag coinneáil 68.33% agus 59.61% dá ghníomhaíocht tosaigh, faoi seach, tar éis 120 nóiméad (Fíor 3a). I gcodarsnacht leis sin, faoi na coinníollacha céanna (40℃ agus 50℃, 120 nóiméad), choinnigh laccase ó *Trametes polyzona* WRF03 64.38% agus 42.92% dá ghníomhaíocht, faoi seach.³³Os a choinne sin, laghdaigh méadú ar an am goradáin agus ar an teocht cobhsaíocht laccase *Trametes polyzona* NRC 620; Tar éis goradáin ag 60℃ agus 70℃ ar feadh 60 nóiméad, laghdaigh a ghníomhaíocht go 39.24% agus 1.72%, faoi seach (Fíor 3a). Ag teacht leis na torthaí turgnamhacha, léirigh laccase ó *Trametes polyzona* WRF03 cobhsaíocht níos airde ag 40 agus 50℃ i rith an phróisis chóireála teirmí.³³Ar an gcaoi chéanna, Lueangjaroenkit et al.^al.37agus Cathaoirleach et.^al.42tuairiscíodh cobhsaíocht lacáisí ó Trametes polyzona KURNW027 agus Trametes polyzona WR710-1 ag 50 °C ar feadh 1 uair an chloig, faoi seach. Mar bhithchatalaíoch úsáideach is infheidhme i réimsí biteicneolaíochta éagsúla, ba cheart go mbeadh dea-chobhsaíocht agus feidhmíocht ag lacáis thar raon leathan teochta.
Cobhsaíocht theirmeastatach (a) agus cobhsaíocht pH (b) lacáis ó *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Rinneadh measúnú ar chobhsaíocht theirmeastatach tríd an tuaslagán einsíme a ghoradh i maolán fosfáite sóidiam 0.05 M (pH 7.0) ag 40, 50, 60, agus 70 °C ar feadh 2 uair an chloig, faoi seach. Rinneadh measúnú ar chobhsaíocht pH tríd an tuaslagán einsíme a ghoradh i maolán citráit 0.1 M agus maolán Tris (pH 3, 4, 6, agus 7) ag 40 °C ar feadh 2 uair an chloig. Ríomhadh an ghníomhaíocht iarmharach ag baint úsáide as ABTS mar shubstráit tar éis goradáin.
Chun na coinníollacha is fearr a chinneadh le haghaidh úsáide agus stórála einsíme, rinneamar imscrúdú ar éifeacht pH ar chobhsaíocht lacáise. Bhí tionchar suntasach ag nochtadh do luachanna pH éagsúla ar chobhsaíocht struchtúr an phróitéine, rud a d’fhág go raibh tionchar aige ar chobhsaíocht agus ar ghníomhaíocht mhóilín an einsíme. Léirigh na torthaí go raibh an einsím níos lú cobhsaí faoi choinníollacha aigéadacha, agus go raibh cobhsaíocht níos fearr aige ag luachanna pH níos airde (réigiúin neodracha agus alcaileacha). Ag luachanna pH de 7.0, 6.0, 4.0, agus 3.0, bhí rátaí coinneála einsíme tar éis 120 nóiméad thart ar 100%, 62.54%, 52.39%, agus 11.14%, faoi seach (Fíor 3b). Léirigh lacáis *Strombus multisus* WRF03 cobhsaíocht níos airde ag luachanna pH neodracha (5.5–6.5) agus cobhsaíocht níos ísle ag luachanna pH aigéadacha (faoi bhun 4.0). Tar éis 120 nóiméad ag luachanna pH de 5.5, 6.0, agus 6.5, bhí na rátaí coinneála einsímí thart ar 82%, 100%, agus 93%, faoi seach.³³Khairin et al.⁴²thug faoi deara go raibh laccase ó Trametes polyzona WR710-1 cobhsaí sa raon pH 6.0 go 7.0, agus Sayed et al.⁴⁵léirigh sé go raibh laccase níos cobhsaí faoi choinníollacha pH neodracha. Mar sin féin, léirigh laccase ó Cerrena unicolor cobhsaíocht faoi choinníollacha alcaileacha (pH 9.0) freisin.⁴⁶Léirigh na laccases a ndearnadh staidéar orthu ardchobhsaíocht thar raon leathan pH. D’fhéadfadh gur tréith thábhachtach í seo d’fheidhmchláir thionsclaíocha.
Ós rud é go mbíonn éifeachtaí spreagthacha agus coisctheacha ag roinnt ian miotail ar ghníomhaíocht einsímí, ní mór a n-éifeachtaí ar ghníomhaíocht einsímí a chur san áireamh in iarratais thionsclaíocha. Tá sé seo ríthábhachtach mar is truailleáin choitianta comhshaoil ​​iad iain miotail a d’fhéadfadh dul i bhfeidhm ar chobhsaíocht agus ar shintéis einsímí eachtarcheallacha.⁴⁷Chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí ian miotail iolracha ar lacáis ó *Pleurotus ostreatus* NRC 620, rinneamar turgnaimh chomhfhreagracha. Mar a thaispeántar i bhFíor 4, ag brath ar an gcineál miotail a úsáideadh, bhí tionchar diúltach ag méadú tiúchan na n-ian miotail ó 2.5 mM go 10 mM ar fheidhm an einsíme. Mar shampla,^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺, agus^Cu²⁺d’fhéadfadh sé gníomhaíocht an einsím a spreagadh agus a ghníomhachtú, agus^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺, agus^K⁺d’fhéadfadh sé gníomhaíocht an einsíme a chosc. Ag tiúchan 10 mM, ba iad iain Cu²⁺ agus Mg²⁺ na gníomhaitheoirí ba chumhachtaí ar ghníomhaíocht lacáise ó *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ag soláthar céim gníomhachtaithe de thart ar 34% agus 20%, faoi seach. Mar sin féin, ag tiúchan 10 mM, ba iad iain Ca²⁺ an coscaire ba chumhachtaí ar lacáise, ag laghdú gníomhaíocht einsíme faoi thart ar 60%.
Éifeacht ian miotail ar ghníomhaíocht lacáis Pleurotus ostreatus NRC 620. Goradh an lacáis ar feadh 10 nóiméad i maolán fosfáite sóidiam (0.05 M, pH 7.0) ina raibh iain miotail éagsúla ag tiúchain 2.5 mM agus 10 mM. Cuireadh tús leis an imoibriú ansin tríd an tsubstráit (ABTS) a chur leis, agus ina dhiaidh sin tomhaiseadh an ghníomhaíocht choibhneasta.
Tá ár dtorthaí comhsheasmhach le torthaí údair eile a fuair amach go bhfeabhsaíonn Mg²⁺ agus Cu²⁺ gníomhaíocht *Trametes polyzona* WRF03³. Fuair ​​Castaño et al.⁴⁸ amach go spreagann iain chopair (Cu²⁺) lacáis ó *Xylaria* sp. go pointe áirithe. Ina theannta sin, rinne Foroutanfar et al.⁴⁹ agus Si et al.⁵⁰ staidéir chomhchosúla ar lacáisí ó *Paraconiothyrium variabile* agus *Trametes pubescens*, faoi seach. Is féidir suíomh ceangailteach copair cineál II (T2) an einsím seo a sháithiú le Cu²⁺ ag tiúchan ar leith, rud a d'fhéadfadh a mhíniú cén fáth a spreagtar gníomhaíocht lacáise ag tiúchain Cu²⁺³⁹ níos airde. Ós rud é gur ocsaídáisí ina bhfuil il-adaimh chopair iad laccases fungais lobhadh bán, tá éifeachtaí ian copair ar ghníomhaíocht laccase éagsúil agus bíonn siad idir spreagúil agus coisctheach agus neodrach.⁵¹ I gcodarsnacht leis sin, Zhou et al.^[52]thuairiscigh sé sin^Cu²⁺chuir cosc ​​ar ghníomhaíocht laccase teirmít faoi thalamh Taiwan (Odontotermes formosanus). Mar sin féin, laccases de Cerena sp. HYB07^[53]agus Clitocybe maxima^[54]níor cuireadh isteach ar iain chopair iad.
Léiríodh sainiúlacht an tsubstráit lena paraiméadair chinéiteacha (Km agus Vmax); dá láidre an dlúthchleamhnas ceangailteach atá ag an tsubstráit leis an einsím, is ísle an luach Km agus is airde an sainiúlacht tsubstráit.^3,21,55Cinneadh paraiméadair chinéiteacha (Km agus Vmax) laccase ó *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ag baint úsáide as bogearraí GraphPad Prism 6.0 tríd an bplota Lineweaver-Burk a phlotaáil (Fíor 5). Agus ABTS á úsáid mar shubstráit, ba iad na torthaí 1.99 mM agus 16217 μmol.^{nóim⁻¹ L⁻¹,}faoi ​​seach. Elsayed et al.²¹Tuairiscíodh gurbh iad 0.1 mM agus 0.064 mM na luachanna Km le haghaidh ocsaídiú ABTS, faoi seach, rud a léiríonn ard-chlaonadh iseimí Lac A agus Lac B le haghaidh ABTS. Ina theannta sin, ba iad 0.182 μmol na luachanna Vmax.^nóim⁻¹agus 0.603 μmol^nóim⁻¹, faoi seach. Bhí an luach Km a fuarthas níos ísle ná luach Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); ina theannta sin, bhí a luach Vmax (1429 mmol min⁻¹) níos ísle freisin^{níos ísle}agus ABTS á úsáid mar shubstráit.33 Ar an gcaoi chéanna, ba iad luachanna Km tiúchan lacáise Lentinus squarrosulus MR13 agus Trametes sp. AH28-2 ná 0.0714 mM agus 0.025 mM, faoi seach, agus ba iad na luachanna Vmax ná 0.0091 mM min−1 agus 0.67 mM min−1 mg−1 (i gcomparáid le ABTS)^{, faoi seach.56,57}
Rinneadh imscrúdú ar éifeacht thiúchan ABTS ar ghníomhaíocht lacáise ó *Pleurotus ostreatus* NRC 620, agus plotaíodh plota Lineweaver-Burk de chómharthacht luas an imoibrithe tosaigh i gcoinne thiúchan ABTS. Tomhaiseadh imoibriú ocsaídiúcháin ABTS le tiúchain éagsúla (0.025–3.0 mM) de lacáis ag pH 4.5 chun na paraiméadair chinéiteacha (Vmax agus Km) a chinneadh. Ríomhadh na tairiseacha cinéiteacha Michaelis-Menten ag baint úsáide as plota Lineweaver-Burk de chómharthacht luas an imoibrithe i gcoinne thiúchan an tsubstráit. Ríomhadh na tairiseacha cinéiteacha ón bplota Lineweaver-Burk ag baint úsáide as bogearraí GraphPad Prism 6.01.
Déanann einsímí soiléirithe traidisiúnta, amhail peictináisí, substaintí peicteacha a hidrealú, rud a laghdaíonn slaodacht agus moirtiúlacht. Briseann siad síos polaisiúicrídí struchtúracha go héifeachtach agus is minic a úsáidtear iad i gcomhar le heinsímí eile, amhail ceallalóisí agus hemiceallúláisí, chun toradh agus soiléireacht a fheabhsú. Mar sin féin, ní dhíríonn peictináisí go sonrach ar chomhdhúile feanólacha, arb iad na príomh-rannpháirtithe iad le moirtiúlacht agus donnú ocsaídiúcháin, go háirithe i súnna amhail sú úll agus sú fíonchaor.⁵⁸I gcodarsnacht leis sin, catalaíonn laccases ocsaídiú comhdhúile feanólacha, ag polaiméiriú iad i móilíní níos mó, dothuaslagtha is féidir a bhaint trí dhríodrú nó scagadh. Ní hamháin go bhfeabhsaíonn an mheicníocht seo soiléireacht ach síneann sé seilfré sú freisin trí laghdú a dhéanamh ar an dóchúlacht go dtarlóidh donnú ocsaídiúcháin de bharr comhdhúile feanólacha. Ina theannta sin, is féidir próisis shoiléirithe bunaithe ar laccase a dhéanamh faoi choinníollacha próiseála éadroma (pH 3.5–5.5, teocht 25–40 °C), rud a fhágann go bhfuil siad oiriúnach do shúnna mín gan cur isteach ar a n-airíonna cothaitheacha nó orgánaileipteacha.⁵⁹Léirigh staidéir gur féidir le cóireáil peictináis sú a shoiléiriú i gceann 1-2 uair an chloig, ach go mbíonn am imoibrithe níos faide (3-6 uair an chloig) ag teastáil de ghnáth le haghaidh cóireála lacáise chun comhdhúile feanólacha a laghdú go hiomlán. Mar sin féin, is féidir an próiseas seo a bharrfheabhsú tríd an einsím a dhíghluaiseacht nó trí lacáis a chomhcheangal le modhanna soiléirithe meicniúla.⁶⁰Sa staidéar seo, léirigh próifíliú einsímí an sliocht amh gníomhaíochtaí suntasacha lacáise agus α-aimiláise, agus bhí gníomhaíochtaí peictináise agus xilanase thar a bheith íseal, agus níor braitheadh ​​​​gníomhaíocht ceallalaise. Dá bhrí sin, ba é gníomhaíocht lacáise ba chúis leis an laghdú ar mhoirtiúlacht agus ar ábhar feanólach den chuid is mó, agus d'fhéadfadh an t-athrú ar slaodacht a bheith mar gheall ar ghníomhaíocht amiláise go páirteach.
Taispeánann Tábla 1 na paraiméadair fhisiciceimiceacha a bhaineann le sú úll úr-bhrúite agus samplaí a ndearnadh cóireáil lacáis orthu. Léirigh na torthaí go raibh toradh sú úll úr-bhrúite (71.59%) níos ísle ná toradh na samplaí a ndearnadh cóireáil lacáis orthu (87.34%). Tá na torthaí seo ag teacht le torthaí Pilnik agus Orange.⁶¹, a léirigh gur féidir le húsáid einsímí i bpróiseáil torthaí toradh sú a mhéadú, scagachán a fheabhsú, agus sú ardchaighdeáin, soiléir a fháil le haghaidh tiúchana. Is é an méadú ar tháirgeacht sú is mó atá mar gheall ar an méadú ar ábhar na siúcraí intuaslagtha sa sú. Le linn hidrealú einsímeach torthaí, scriostar mesoglea agus peictin i mballaí cealla an táirge agus déantar iad a thiontú ina substaintí intuaslagtha amhail siúcraí neodracha agus aigéid.^62.Bhí luach pH sú úll a ndearnadh cóireáil einsím air i bhfad níos ísle ná luach pH an ghrúpa rialaithe (P < 0.05), agus mhéadaigh luach pH an dá ghrúpa go suntasach le linn stórála (Tábla 1). Tá na torthaí seo comhsheasmhach le torthaí Mark et al.⁶³, a thug faoi deara gur laghdaigh pH sú torthaí cnónna caisiú tar éis stórála i ndiaidh cóireála teasa. D’fhéadfadh díghrádú peictin agus foirmiú aigéad galactúrónach tar éis cóireála einsíme a bheith freagrach as an méadú ar pH le linn stórála. D’fhan pH na samplaí a ndearnadh cóireáil einsíme orthu idir 4.05 agus 4.31 le linn na stórála, agus bhí pH sú úll neamhchóireáilte idir 4.12 agus 4.33.
Léirigh aigéadacht iomlán (TA) na samplaí neamhchóireáilte agus na samplaí a ndearnadh cóireáil lacáise orthu treocht laghdaitheach de réir mar a mhéadaigh an t-am stórála (Tábla 1). Cuireadh an laghdú ar aigéadacht i leith thiontú aigéid orgánacha go carbaihiodráití nó imoibrithe einsímeacha, chomh maith le hocsaídiú le linn stórála sú.⁶⁴Bhí aigéadacht iomlán na samplaí rialaithe sú úll agus cóireáilte le heinsímí níos ísle ná aigéadacht súnna eile (sú sútha talún 0.9%, sú pluma 2.2%, sú kumquat 1.0%, sú aibreog 2.4%, sú oráiste 0.8%), ach cosúil le aigéadacht súnna eile (m.sh., sú piorra 0.3%).⁶²D’fhéadfadh na difríochtaí seo i sú úll úr-bhrúite neamhchóireáilte a bheith mar gheall ar fhachtóirí éagsúla amhail coinníollacha fáis, fachtóirí géiniteacha, leibhéal aibíochta agus modhanna próiseála.⁶⁵Tá an laghdú ar aigéadacht iomlán sú úll rialaithe agus sú úll cóireáilte le lacáis ag teacht leis na torthaí a chuir Singh et al. i láthair.⁶⁶maidir leis an laghdú ar aigéadacht iomlán sú úll Jin Nuo tar éis 74 lá stórála. Ar an láimh eile, Oshmiansky agus Wojdylo⁶⁷ní bhfuarthas aon athruithe suntasacha in aigéadacht sú úll agus staidéar á dhéanamh ar éifeacht modhanna traidisiúnta soiléirithe.
Léiríonn na torthaí a chuirtear i láthair i dTábla 1 go raibh luach iomlán na solad intuaslagtha (TSS) sa sú úll a ndearnadh cóireáil lacáise air níos airde ná luach an tsampla neamhchóireáilte. Tá na torthaí seo ag teacht leis na staidéir fhoilsithe.^{. 68}Ina theannta sin, léiríonn Tábla 1 gurbh é 9.58 luach TSS an ghrúpa rialaithe sú úll ag an bpointe ama tosaigh agus gur shroich sé 11.05 faoi dheireadh na tréimhse stórála. Tá na luachanna seo níos ísle ná luachanna TSS sú úll úr a thuairiscigh Hamid et al.^{. 69}(11.2 agus 11.80, faoi seach). Mhéadaigh luach TSS na samplaí sú úll a ndearnadh cóireáil orthu le laccase go suntasach, ag tosú ó 11.23 agus ag sroicheadh ​​12.93 tar éis dhá sheachtain stórála ag 4°C (Tábla 1). Breathnaíodh méadú comhchosúil ar TSS le linn stórála i dtorthaí citris, líomóidí, agus oráistí milse freisin. D’fhéadfadh an méadú ar sholaid intuaslagtha iomlána (TSS) le linn stórála a bheith mar gheall ar hidrealú polaisiúicrídí (stáirse) go monaisiúicrídí (siúcraí), an méadú ar thiúchan mar gheall ar dhíhiodráitiú sú, agus díghrádú peictin sa sú go solaid intuaslagtha. Is dócha gur mar gheall ar an méadú ar shiúcraí intuaslagtha atá an méadú ar sholaid intuaslagtha iomlána (TSS), a d’fhéadfadh a bheith ann trí chomhshó peictin nó ceallalóis go siúcraí intuaslagtha ag peictin nó ceallalóis, faoi seach, nó trí hidrealú stáirse go siúcraí, mar a thuairiscigh Hamed et al.^69.Is féidir breathnú go hamhairc ar éifeacht lacáis ar airíonna sú úll, toisc go léiríonn sú úll atá cóireáilte le lacáis sreabhacht níos fearr agus slaodacht níos ísle ná sú neamhchóireáilte. Tá an breathnóireacht seo taifeadta i dTábla 1; Ba é 1.87 cP slaodacht an tsampla a ndearnadh cóireáil einsím air, agus ba é 2.95 cP slaodacht an tsampla rialaithe. Is dócha gur mar gheall ar an gcumas coinneála uisce níos airde atá ag substaintí cosúil le peictin agus foirmiú struchtúr líonra comhtháite atá an laghdú suntasach seo ar slaodacht.
Sa staidéar seo, rinneadh imscrúdú ar éifeacht laccase ar innéacs donnúcháin (BI) sú úll tríd an ionsú a thomhas ag 420 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar. Taispeántar na torthaí i dTábla 1. Le linn stórála, léirigh BI samplaí sú úll sa ghrúpa cóireáilte agus neamhchóireáilte araon treocht mhéadaitheach de réir a chéile. Léiríonn BI an méid donnúcháin agus is féidir leis feidhmiú mar...^{rud tábhachtach}táscaire ar imoibrithe donnúcháin einsímeacha agus neamh-einsímeacha. Mhéadaigh an ionsú go suntasach le linn stórála (P < 0.05). Ag deireadh na stórála, an_A420Mhéadaigh luach samplaí sú úll sna grúpaí rialaithe agus sna grúpaí a ndearnadh cóireáil einsím orthu faoi thart ar 217% agus 121%, faoi seach (Tábla 1). Léiríonn na torthaí gur féidir le cóireáil einsím an céim donnúcháin a laghdú go héifeachtach faoi thart ar 56%. Léiríonn torthaí Bezerra et al.^[19] atá comhsheasmhach lenár dtorthaí; D'úsáid siad snáithín lacáis-glútaraldehyde-cnó cócó chun sú úll a shoiléiriú, rud a laghdaigh a dhath bunaidh faoi 61%.
Cé go mbíonn éifeachtaí cothaitheacha agus teiripeacha dearfacha ag polaifeinóil i súnna torthaí ar chorp an duine, is féidir leo imoibriú le próitéiní freisin, rud a fhágann go mbíonn an sú scamallach, go ndéantar é a dhríodar nó go ndéantar é a mhoilliú, rud a athraíonn blas agus boladh an táirge agus a laghdaíonn a seilfré.⁷¹Ba é aidhm an staidéir seo ná cion na gcomhdhúl feanólach i sú úll a laghdú go sábháilte ag baint úsáide as laccase ó Pleurotus ostreatus NRC 620. Léiríonn na torthaí a chuirtear i láthair i dTábla 1 gur laghdaíodh cion iomlán na gcomhdhúl feanólach i sú úll a ndearnadh cóireáil laccase air go suntasach roimh stóráil ag 4 °C. Ina theannta sin, laghdaigh cion iomlán na gcomhdhúl feanólach le linn stórála sa dá shampla a ndearnadh staidéar orthu (Tábla 1). Taighde le Sandri et al.⁷²léirigh sé gur féidir le sú úll atá cóireáilte le heinsím a ghníomhaíocht frithocsaídeach agus a ábhar comhdhúile feanólacha a choinneáil. Mar sin féin, ní raibh torthaí staidéir le Lettera et al.⁷³Léiríonn sé gur féidir le cóireáil sú oráiste le lacáis fungasach cion na gcomhdhúl feanólach ann a laghdú suas le 45%.
Tá sé léirithe go bhfuil airíonna ag comhdhúile feanólacha amhail scabhtáil fréamhacha saora, laghdú agus múchadh ocsaigine singil, aistriú adamh hidrigine, agus bronntanas leictreon do fréamhacha saora, rud a fhágann gur frithocsaídeoirí cumhachtacha iad.⁷⁴Dá bhrí sin, sa staidéar seo, úsáideadh modhanna bunaithe ar DPPH agus FRAP chun meastóireacht a dhéanamh ar éifeacht laccase ar ghníomhaíocht frithocsaídeach sú úll a stóráiltear i gcuisneoir ar feadh 14 lá (Tábla 2). Léirigh an dá mhodh méadú ar ghníomhaíocht frithocsaídeach le linn stórála, rud a d'fhéadfadh a bheith mar gheall ar an méadú ar chomhdhúile feanólacha saora nó foirmiú táirgí imoibrithe Maillard (MRPanna), agus is dócha gurb iad táirgí imoibrithe Maillard is cúis leis an méadú ar ghníomhaíocht frithocsaídeach.⁷⁵Táirgeann imoibrithe donnúcháin neamh-einsímeacha (lena n-áirítear díghrádú aigéid ascorbaigh, imoibrithe Maillard, agus díghrádú siúcraí atá catalaíoch ag aigéad) líocha donn (melanoidiní). Is féidir le táirgí díghrádaithe idirmheánacha aigéid ascorbaigh agus táirgí díghrádaithe siúcra (amhail comhdhúile carbóinile) imoibriú le aimínaigéid trí imoibrithe Maillard.⁷⁶Cé go bhfuil staidéar fairsing déanta ar dhonnú torthaí agus glasraí le linn stórála, tá ár dtuiscint ar na frithghníomhartha seo teoranta fós.⁷⁷I gcomparáid leis an modh FRAP, léirigh sú úll cóireáilte le lacáis gníomhaíocht frithocsaídeach i bhfad níos ísle tríd an modh DPPH (Tábla 2), agus mhéadaigh gníomhaíocht frithocsaídeach na samplaí uile go suntasach de réir mar a mhéadaigh an t-am stórála. Baineadh úsáid as dhá mhodh éagsúla chun gníomhaíocht frithocsaídeach a chinneadh sa staidéar seo toisc go bhfuil a bprionsabail difriúil. Tomhaiseann an modh DPPH an cumas chun fréamhacha saora a neodrú, agus tomhaiseann an modh FRAP an cumas chun iain iarainn a laghdú. Dá bhrí sin, moltar modhanna iolracha a úsáid chun gníomhaíocht frithocsaídeach a chinneadh chun tuiscint níos fearr a fháil ar ghníomhaíocht frithocsaídeach na samplaí a ndearnadh staidéar orthu.⁷⁸
Ceann de na príomhthorthaí ón staidéar seo ná go léiríonn lacáise *Pleurotus ostreatus* NRC 620 gníomhaíocht is fearr ag 70°C agus pH 3.0. I gcomparáid le lacáisí fungasacha eile a úsáidtear go coitianta chun sú a shoiléiriú, amhail lacáisí *Trametes versicolor* agus *Ganoderma lucidum*, léiríonn *P. ostreatus* NRC 620 cobhsaíocht theirmeach níos airde agus pH níos aigéadaí. De ghnáth, léiríonn lacáisí ó *Trametes versicolor* agus *Ganoderma lucidum* gníomhaíocht is fearr sa raon 50-60°C agus ag luachanna pH idir 3.5 agus 5.0. Féadfaidh an difríocht seo cur le héifeachtúlacht fheabhsaithe soiléirithe sú, go háirithe i gcás súnna aigéadacha ina bhfuil cobhsaíocht ag luachanna pH níos ísle ríthábhachtach. Saintréith uathúil *P. I gcomparáid le lacáisí fungasacha eile a ndearnadh staidéar orthu, léiríonn *Pleurotus ostreatus* NRC 620 an cumas feidhmiú go héifeachtach faoi dhálaí níos dúshlánaí. Tugann a theocht gníomhaíochta optamach níos airde le fios go bhféadfadh buntáistí a bheith ann in iarratais thionsclaíocha, amhail rátaí imoibrithe níos tapúla agus laghdú ar éilliú miocróbach. D’fhéadfadh a pH íseal, atá oiriúnach go maith do nádúr aigéadach go leor súnna, a bheith úsáideach i bpróisis shoiléirithe súnna. Tugann na torthaí seo údar le tuilleadh iniúchta le haghaidh feidhmchláir ar scála mór, rud a fhágann gur rogha inmharthana é *Pleurotus ostreatus* NRC 620 seachas foinsí traidisiúnta lacáise fungasacha. I gcomparáid le staidéir roimhe seo, fuarthas amach gurb é 60°C an teocht is fearr agus gurb é 3.0 an pH is fearr. Tar éis imoibrithe ag 60°C ar feadh 80 nóiméad, choinnigh lacáise *Ganoderma lucidum*⁴⁶% dá ghníomhaíocht.79 De réir Kurniawati agus Nicelle⁸⁰, Taispeánann einsímí *Ganoderma lucidum* cobhsaíocht den scoth go measartha ag 25°C agus luachanna pH idir 5.0 agus 8.0, agus cobhsaíocht ag pH 6.0 agus teochtaí idir 10 agus 30°C. Sa staidéar seo, fuarthas amach gurbh iad 3.0 agus 70°C, faoi seach, an pH agus an teocht is fearr le haghaidh gníomhaíochta einsíme do *Pleurotus ostreatus*. Tar éis goradáin ag 40°C agus 50°C ar feadh dhá uair an chloig, choinnigh an einsím 68.33% agus 59.61% dá ghníomhaíocht, faoi seach. Ina theannta sin, léirigh lacáis Pleurotus ostreatus NRC 620 ardghníomhaíocht thar raon teochta leathan ó 50°C go 80°C, ag baint beagnach amach an ghníomhaíocht uasta (69%–98%), agus an ghníomhaíocht uasta breathnaíodh ag 70°C.
Mar fhocal scoir, léirigh laccase beacán oisrí NRC620, a fuarthas faoi dhálaí statach, gníomhaíocht agus cobhsaíocht optamach thar raon dálaí pH agus teochta, rud a léiríonn cobhsaíocht níos fearr i gcomparáid le foinsí einsíme eile. Mhéadaigh cur leis 10 mM MgSO₄ agus CuSO₄ gníomhaíocht einsíme thart ar 21% agus 35%, faoi seach. Nuair a próiseáladh é i sú úll, laghdaigh an einsím pH agus slaodacht, agus níor laghdaigh an cion feanólach ach beagán le linn stórála.
Deimhníonn na torthaí acmhainneacht laccase sa tionscal bia, go háirithe i soiléiriú deochanna. Trí chomhdhúile feanólacha a bhriseadh síos go sonrach, ní hamháin go laghdaíonn laccase moirtiúlacht agus go bhfeabhsaíonn sé soiléireacht ach coinníonn sé cáilíocht súnna torthaí faoi dhálaí oibriúcháin éadroma freisin. Murab ionann agus gníomhairí soiléirithe traidisiúnta amhail geilitín, beintonít, agus glóthach shilice, ní ghineann laccase dramhaíl ná ní bhaineann sé boladh taitneamhach as deochanna, rud a fhágann gur rogha níos neamhdhíobhálaí don chomhshaol agus níos inbhuanaithe é. Ina theannta sin, i gcomparáid le heinsímí agus modhanna scagacháin eile, cuireann laccase réiteach spriocdhírithe agus cost-éifeachtach ar fáil gan cur isteach ar cháilíocht an táirge.
Kyomuhimbo, HD agus Brink, HG. Feidhmeanna agus straitéisí imdhíonachta laccases ina bhfuil copar; athbhreithniú. Heliyon 9, e13156 (2023).